產(chǎn)品描述

        HOLMES ssDNA reporter (FAM)是單鏈DNA寡核苷酸探針，5′端標(biāo)記FAM熒光報(bào)告基團(tuán) (Reporter)，3′端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán) (Quencher)。當(dāng)HOLMES ssDNA reporter探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)會(huì)被淬滅基團(tuán)淬滅。而當(dāng)HOLMES ssDNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號(hào)。常見的Cas12a、Cas12b和Cas12f在與guide RNA、target DNA組成三元復(fù)合物后，都會(huì)被激活針對(duì)ssDNA的反式剪切活性，因此HOLMES ssDNA reporter (FAM)可以作為Cas12家族反式剪切的底物，通過發(fā)出放大的熒光信號(hào)指示特異靶標(biāo)的存在。
HOLMES ssDNA reporter (FAM)探針經(jīng)過特別的序列優(yōu)化，對(duì)Cas12a、Cas12b和Cas12f反式切割活性高度敏感，可作為Cas12家族反式剪切的報(bào)告探針，被廣泛用于CRISPR診斷反應(yīng)體系以便對(duì)靶標(biāo)核酸進(jìn)行快速檢測。

 實(shí)驗(yàn)流程

1.反式剪切實(shí)驗(yàn)體系

◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整，用量較少時(shí)可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預(yù)期反應(yīng)到達(dá)平臺(tái)期的時(shí)間可參考各批號(hào)Cas酶transU的具體數(shù)值，詳見本公司提供的COA檢測報(bào)告。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測熒光信號(hào)，每30 sec采集一次熒光信號(hào)，反應(yīng)溫度根據(jù)不同的Cas12酶最適溫度進(jìn)行設(shè)定。

 產(chǎn)品組分

a.HOLMES ssDNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為11.53 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請(qǐng)先短暫離心，然后加入115.3 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無反復(fù)凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個(gè)月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應(yīng)體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個(gè)月內(nèi)使用。

 保存條件

        -20℃避光儲(chǔ)存；≦4℃運(yùn)輸。