產(chǎn)品描述

        LbCas12a (又名Cpf1)核酸酶來源于Lachnospiraceae bacterium ND2006菌株。LbCas12a是由crRNA介導(dǎo)的DNA核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標(biāo)雙鏈DNA，使DNA雙鏈斷裂并生成粘性末端。而LbCas12a特異地剪切單鏈DNA靶標(biāo)不依賴PAM序列。此外，雙鏈或單鏈DNA靶標(biāo)均能激活LbCas12a的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當(dāng)LbCas12a酶與crRNA、靶標(biāo)DNA結(jié)合形成三元復(fù)合物后，便會(huì)被激活針對(duì)非特異序列ssDNA的反式剪切活性，將體系中的任意序列ssDNA切碎。因此，LbCas12a酶不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)，詳見本公司開發(fā)的HOLMES[1]核酸快檢技術(shù)。

本產(chǎn)品將無甘油LbCas12a核酸酶凍干，可用于常溫運(yùn)輸及保存，使用配套的凍干Cas酶復(fù)溶液復(fù)溶后，具有與本公司非凍干型LbCas12a (Cpf1) Nuclease（#32108）同等的反應(yīng)活性。本產(chǎn)品包括可用于單個(gè)反應(yīng)的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應(yīng)體系構(gòu)建的需求。

 產(chǎn)品組分

◆ 建議使用 136 μL 復(fù)溶液復(fù)溶一管 100 μg 的 LbCas12a 凍干粉，復(fù)溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。

保存條件

         本產(chǎn)品常溫保存及運(yùn)輸；復(fù)溶后于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

 實(shí)驗(yàn)流程

1.冰上制備如下CRISPR反式剪切反應(yīng)體系：

a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 凍干粉，建議每管加入 136 μL 復(fù)溶液，復(fù)溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。

2.立即放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)熒光信號(hào)，37℃反應(yīng)，每30 sec采集一次熒光信號(hào)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注意事項(xiàng)

2. 為防止 RNase 污染，請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)干凈整潔，操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩，實(shí)驗(yàn)所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。

3. 本產(chǎn)品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應(yīng)體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購(gòu)。

4. 復(fù)溶后的 LbCas12a 需在冰上配制反應(yīng)體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個(gè)月)。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。