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花色苷檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S)

貨號(hào) SH0034 售價(jià)(元) 1080
規(guī)格 100T/96S CAS號(hào)
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貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0034

花色苷檢測(cè)試劑盒(微量法 100T/96S)

100/96

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素,屬黃酮類化合物?;ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中,使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色,是植物主要的呈色物質(zhì)。

測(cè)定原理:

采用pH示差法測(cè)定花色苷含量,當(dāng)pH1.0時(shí)花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當(dāng)pH4.5時(shí),花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色查爾酮形式,530處無(wú)吸收峰, 利用此特性分別測(cè)定在不同pH下的530nm700nm處的吸光度值。pH示差法減少了溶液pH和溶劑差異的影響,排除了其他非花色苷類物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。

試劑的組成和配制:

產(chǎn)品名稱

SH0034-100T/96S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

20ml

4℃

試劑二:液體

20ml

4℃

說(shuō)明書(shū)

一份

需自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

花色苷的提取:

按照烘干樣品質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g烘干樣品,加入1ml提取液),充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,提取液定容至1 ml,蓋緊后4℃浸提24 h,8000 g,常溫離心10 min,取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上;試劑一和試劑二25℃(室溫)預(yù)熱10min以上;

2、取20 μl上清液和180 μl試劑一(相當(dāng)于稀釋10倍),40℃水浴20min,分別測(cè)定530nm700nm處的吸光值,分別記為A1A2

3、 20 μl上清液和180 μl試劑二(相當(dāng)于稀釋10倍),40℃水浴20min,分別測(cè)定530nm700nm處的吸光值,分別記為A3A4。

4、 計(jì)算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意:

如果A1大于1,可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù),保證總體積200 μl不變,如10 μl上清液和190 μl試劑一(相當(dāng)于稀釋20倍);如果A1小于0.1,可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù),保證總體積不變,如100 μl上清液和100 μl試劑一(相當(dāng)于稀釋2倍),使A1保持在0.1~1范圍內(nèi),可提高檢測(cè)靈敏度;同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例;計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入下述公式中。

花色苷含量計(jì)算

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷ε×d×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V:提取液體積,1×10-3L;ε:花色苷的摩爾消光系數(shù),2.69×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;M:花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量:449.2g/molF:稀釋倍數(shù);1061g=106μgW:樣本干重:g。

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷ε×d×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V:提取液體積,1×10-3L;ε:花色苷的摩爾消光系數(shù),2.69×104 L / mol /cm;d96孔板光徑,0.5cmM:花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量:449.2g/mol;F:稀釋倍數(shù);1061g=106μgW:樣本干重:g。

ΔA線性范圍為0.005-0.5

 

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