測定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。

測定原理：

酸性條件下，S-ACPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。

試劑組成和配置：

試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=140（μl）：20（μl）：21（ml）的比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，如出現(xiàn)白色絮狀沉淀則不能用。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2ml試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入8ml；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑六：液體1.5ml×1支，0.05mg/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水。

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。

測定步驟：

1、試劑一的配制：見試劑的組成和配制。

2、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至680nm，蒸餾水調(diào)零。

3、樣本測定：

混勻，40℃水浴20min，8000g 25℃離心10min，取上清液200μl，680nm下讀取各管吸光值A

注意事項

標準管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-ACPT活性計算：

單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個 S-ACPT活力單位。

S-ACPT(mg/d/g土樣)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標準管

C標準管：標準管濃度，0.05mg/ml；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；T：反應(yīng)時間，30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.02g。