測定意義：

漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。

測定原理：

漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

試劑組成和配制：

工作液：粉劑×2瓶，4℃避光保存，臨用前每瓶加10ml試劑一溶解。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩。

測定步驟：

1、可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到420nm，蒸餾水調(diào)零。

37℃震蕩反應(yīng)10min，冰浴5min，10000g，4℃離心5min，分別取上清200μl于420nm處測定吸光值，記為記為A對照和A測定。△A=A測定-A對照。

酶活性計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位（U）。

SL活性（nmol/min /g土樣）= ×V反總÷W÷T= 0.694×△A÷W

ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.25ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，10min

b. 用96孔板測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位（U）。

SL活性（nmol/min /g土樣）= ×V反總÷W÷T= 1.388×△A÷W

ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.25ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，10min

注意事項：

1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。

2、測定之前進行預(yù)實驗，若吸光值較高，請將樣品用提取液進行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。