測定意義：

LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

測定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。

組成：

試劑二：液體14ml×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體10μl×1瓶，10 μmol/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 ml甲苯，充分溶解。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100ml、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體: 直接檢測。

LPS測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。

2. 在5ml EP管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應(yīng)10 min

37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液

37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取800μl上層液加入1 ml玻璃比色皿，于710nm處測定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

LPS活性計算公式：

1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W

（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義：37℃中每10⁴個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量

2. 血清等液體LPS活性

活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/ml) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]

C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/ml；V反總：反應(yīng)總體積，2ml；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.125ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，10 min。