測(cè)定意義：

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類(lèi)和許多動(dòng)物體內(nèi)，線粒體乙醛脫氫酶能把對(duì)生物體有害的醇類(lèi)轉(zhuǎn)化，所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注；同時(shí)，乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測(cè)方面有較廣泛的研究應(yīng)用。

測(cè)定原理：

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH，在340nm處的吸光值會(huì)增加，測(cè)定340nm處的吸光值變化，可計(jì)算得到乙醛脫氫酶的活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

ALDH提取:

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm。

2、 操作表

ALDH酶活計(jì)算:

a． 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 804×△A÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/10⁴cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T= 804×△A÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（4）按液體體積計(jì)算

酶活定義：每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/ml）= ×V反總÷V樣÷T= 804×△A

：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3 L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T = 1608×△A÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/10⁴cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T= 1608×△A÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

酶活定義：每ml樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個(gè)酶活單位。

ALDH酶活（nmol/min/ml）= ×V反總÷V樣÷T= 1608×△A

：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3 L/μmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g