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單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）檢測試劑盒(微量法100T/96S)
| 貨號 | SH0426 | 售價（元） | 864 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0426 |
單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）檢測試劑盒(微量法100T/96S) |
100T/96S |
測定意義：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導致細胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運轉出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。
測定原理：
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應的醛，進一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計算MAO活性。
試劑組成和配制：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0426-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
120ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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需自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、稱取約0.1g樣品，加1 ml預冷的提取液一充分冰浴勻漿，1000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉移到另一預冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1ml預冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預冷的1ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）。
2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉移到另一預冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 ml預冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預冷的1.0 ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。
3、血清：直接測定。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至360nm，蒸餾水調(diào)零。
2、操作表：
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試劑名稱(μl) |
對照管 |
測定管 |
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酶液（μl） |
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20 |
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試劑一（μl） |
180 |
160 |
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試劑二（μl） |
20 |
20 |
混勻，于微量石英比色皿/96孔板，對照管調(diào)零，測定360nm處吸光值A1，然后37℃水浴60min，對照管調(diào)零，測定360nm處吸光值A2。ΔA=A1-A2 注意：空白管只需測定一次。
MAO活性計算公式：
a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、按蛋白含量計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / mg prot）= 
×V反總÷（V樣× Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算：
酶活定義：37℃，pH7.6時，每克樣品1min內(nèi)轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=
×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照細胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每104個細胞1min內(nèi)轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / 104 cell）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）÷T
= 114×ΔA÷細胞數(shù)量
4、按照液體體積計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每升血清1min內(nèi)轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min /L）=
×V反總÷V樣=114×ΔA
ε：底物摩爾消光系數(shù)，1460L /mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應時間，60min，W：樣本質(zhì)量，g
a．用96孔板測定的計算公式如下
1、按蛋白含量計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / mg prot）= 
×V反總÷（V樣× Cpr）÷T= 228×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算：
酶活定義：37℃，pH7.6時，每克樣品1min內(nèi)轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=
×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 228×ΔA÷ W
3、按照細胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每104個細胞1min內(nèi)轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min / 104 cell）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）÷T
= 228×ΔA÷細胞數(shù)量
4、 按照液體體積計算
酶活定義：37℃，pH7.6時，每升血清1min內(nèi)轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性（nmol/min /L）=
×V反總÷V樣=228000×ΔA
ε：底物摩爾消光系數(shù)，1460L /mol /cm； d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應總體積，0.2ml；V樣：反應中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應時間，60min，W：樣本質(zhì)量，g
注意事項：
吸光度變化應該控制在0.01～0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變。